Nội dung phim Gián Điệp xoay quanh những nhiệm vụ tình báo của Trương Ký Sinh do Hồ Hạnh Nhi đảm nhiệm và Chu Tế Kê do Tiêu Chính Nam thủ vai. Hai người đều lớn lên cùng nhau từ một vùng quê nghèo và có tinh thân yêu nước sâu sắc. Chính vì vậy, họ chọn con đường theo cách mạng để phục vụ đất nước, khát khao cháy bỏng chờ ngày đất nước được giải phóng.Sau đó, Ký Sinh gặp được một thành viên của đảng cách mạng khác là Giang Thượng Hồng, 2 người tâm đầu ý hợp và được sát cánh bên nhau lên đã nảy sinh tình cảm. Trong lúc đó, xuất hiện một kẻ người Nhật gốc Trung là Suzuki Kazuo, hắn chính là em trai song sinh của Thượng Hồng bị thất lạc từ nhỏ. Anh ta phục vụ người Nhật, hại dân trung hoa và cũng đem lòng mến mộ cô gái cách mạng Ký Sinh. Mọi chuyện sẽ ra sao khi 2 anh em song sinh vừa phải đối đầu trên chiến trường vừa phải cạnh tranh trên tình trường…